|
Патент РФ № 2506088
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ НА ОСНОВЕ ЖИВЫХ ЛИЧИНОК НЕМАТОД РОДА Trichinella Railliet (1895) ДЛЯ ИММУНИЗАЦИИ ЖИВОТНЫХ И ЧЕЛОВЕКА, ПРИМЕНЕНИЕ МОЛОКА ЖИВОТНОГО, ИММУНИЗИРОВАННОГО ЭТОЙ ВАКЦИНОЙ, В КАЧЕСТВЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЫВОРОТКИ ИЗ КРОВИ ИММУНИЗИРОВАННЫХ ЖИВОТНЫХ И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ С ПОМОЩЬЮ ТАКОЙ СЫВОРОТКИ
МПК A61K 35/00(2006.01)
A61K 39/395(2006.01)
A61P 37/00(2006.01)
Заявка:
2012106224/10, 2012.02.21
Дата начала отчета срока действия патента: 2012.02.21
Дата подачи заявки: 2012.02.21
Опубликовано: 2014.02.10
Авторы:
Бритов Василий Александрович
Патентообладатели:
Бритов Василий Александрович
Бушукин Иван Васильевич
Бушукин Олег Иванович
Документы, цитированные в отчёте о поиске:
RU 2172182 C1, 20.08.2001.
RU 96123906 A, 20.03.1999.
RU 2348427 C2, 10.03.2009.
Реферат
Группа изобретений относится к области биотехнологии. Способ получения вакцины предусматривает скрещивание двух различных видов из 4: T.spiralis, T.nativa, T.pseudospiralis и T.britovi и отбор той линии, которая обладает более низкими патогенными и более высокими иммуногенными свойствами путем заражения личинками трихинелл мышей и контроля эмбриогенеза, затем через 1,5-2 месяца отделяют мышечную ткань зараженной мыши и выделяют инвазионные личинки, которые используют для повторного заражения дозой, составляющей 200-300 личинок, определяют степень заражения, а для изготовления вакцины используют ту линию трихинелл, заражение которой приводит к наиболее легкой форме заболевания мыши, а повторное заражение не приводит к заболеванию. Молоко животных, иммунизированных вакциной, полученной вышеописанным способом, используют в качестве средства для профилактики и лечения заболеваний иммунной системы. Вышеописанную вакцину используют также для получения сыворотки. При этом вакцину вводят орально в дозе от 5000 до 20000 живых личинок, начиная с 10-14 дня после введения препарата, производят обычную терапевтическую коррекцию, как при трихинеллезе, а забор крови осуществляют через 30 дней после введения препарата. Полученную сыворотку человеку вводят по схемам: либо перорально начиная с 0,05 мл за один прием, 3 - раза в день и доводят до 1,2 мл, прибавляя за каждый прием по 0,05 мл, а затем в обратном порядке по убыванию, либо в виде инъекций парентерально по 1-2 мл с перерывом в 2-а дня, а животному - по 10-15 мл в виде инъекций трехкратно через 5 дней с целью профилактики и лечения заболеваний иммунной системы. Использование вышеуказанных изобретений позволит повысить эффективность профилактики и лечения заболеваний иммунной системы. 4 н.п. ф-лы, 9 пр.
Формула изобретения
1. Способ получения вакцины на основе живых личинок нематод рода Trichinella Railliet (1895) для иммунизации животных и человека, включающий скрещивание двух различных видов трихинелл из четырех: T.spiralis, T.nativa, T.pseudospiralis, T.britovi и отбор для получения вакцины той линии трихинелл, которая обладает более низкими патогенными и более высокими иммуногенными свойствами путем заражения личинками трихинелл лабораторных животных, в качестве которых используют мышей и контроля эмбриогенеза, после чего через 1,5-2 месяца отделяют мышечную ткань зараженного лабораторного животного и выделяют инвазионные личинки, которые используют для повторного заражения лабораторного животного дозой, составляющей для мышей 200-300 личинок, после чего определяют степень заражения, по которой судят об иммуногенности и патогенности линий трихинелл, при этом для изготовления вакцины используют ту линию трихинелл, заражение которой приводило к наиболее легкой форме заболевания лабораторного животного, а повторное заражение не приводило к заболеванию.
2. Применение молока животного, иммунизированного вакциной, состоящей из живых личинок линии трихинелл, полученной путем скрещивания двух различных видов из четырех: T.spiralis, T.nativa, T.pseudospiralis, T.britovi с последующим отбором по более низким патогенным и более высоким иммуногенным свойствам, в качестве средства для профилактики и лечения заболеваний иммунной системы.
3. Способ получения сыворотки из крови животного, включающий иммунизацию животных-продуцентов, в качестве которых используют копытных животных, и при достижении максимального числа антител в крови животного производят забор крови с последующим отделением сыворотки общепринятыми методами и ее стерилизации, отличающийся тем, что иммунизацию животных осуществляют путем орального введения вакцины, состоящей из живых личинок линии трихинелл, полученной путем скрещивания двух различных видов из четырех: T.spiralis, T.nativa, T.pseudospiralis, T.britovi с последующим отбором по более низким патогенным и более высоким иммуногенным свойствам, в дозе, зависящей от веса животного-продуцента и составляющей от 5000 до 20000 живых личинок, после чего животному-продуценту, начиная с 10-14 дня после введения вакцины, производят обычную терапевтическую коррекцию, как при трихинеллезе, а забор крови осуществляют через 30 дней после введения препарата.
4. Способ профилактики и лечения заболеваний иммунной системы животного и человека с помощью иммунной сыворотки, включающий применение сыворотки, полученной из крови иммунизированных животных-продуцентов, отличающийся тем, что иммунизацию животных-продуцентов осуществляют вакциной, состоящей из живых личинок линии трихинелл, полученной путем скрещивания двух различных видов из четырех: T.spiralis, T.nativa, T.pseudospiralis, T.britovi с последующим отбором по более низким патогенным и более высоким иммуногенным свойствам, а полученную сыворотку человеку вводят по схемам: либо перорально, начиная с 0,05 мл за один прием, 3 - раза в день и доводят до 1,2 мл, прибавляя за каждый прием по 0,05 мл, а затем в обратном порядке по убыванию, либо в виде инъекций парентерально по 1-2 мл с перерывом в 2 дня, при этом кратность приема по первой схеме, кратность и дозы инъекций по второй схеме подбирают индивидуально с учетом возраста, сопутствующих болезней и состояния больного, а животному - по 10-15 мл в виде инъекций трехкратно через 5 дней.
Описание
Группа изобретений относится к биотехнологии, иммунологии, медицине и ветеринарии и может найти применение при изготовлении вакцин, сывороток, средств для лечения и профилактики иммунодефицитных состояний, бактериальных и вирусных инфекций человека и животных.
По разным оценкам от 30% до 50% взрослого населения разных стран мира страдает иммунодефицитом (ослаблена функция иммунной системы). Причин этому много, но главная из них - традиция питания, когда большая часть пищи и воды стерилизуется высокой температурой, при которой природные антигены разрушаются. Без антигенов иммунитет не формируется, развивается иммунодефицит. На этом фоне появляются различные болезни, в том числе многие инфекционные, например, туберкулез, бруцеллез, лейкоз, ВИЧ-инфекция (СПИД) и другие, характеризующиеся хроническими воспалительными явлениями желудочно-кишечного тракта, дыхательной, урогенитальной систем, носоглотки, опорно-двигательного аппарата и кожи. В последствии в местах хронических воспалений развиваются злокачественные новообразования. Ограниченные возможности лечения опухолевых заболеваний методами хирургии, химиотерапии и лучевой терапии делают актуальным поиск новых способов лечения онкологических больных, в частности, перспективным считается развитие методов иммунотерапии, принцип действия которых основывается на усилении противоопухолевой защиты, заложенной в иммунитете человека. Одним из эффективных способов иммунотерапии считается вакцинация, эффективность которой зависит от силы иммунного ответа, вызванного антигенами, либо входящими в состав вакцины, либо требующихся на различных стадиях их производства.
Известны способы получения противоопухолевой вакцины, раскрытые в патентах US: 5030621 (публ. 09.07.1991), 5635188 (публ. 3.06.1997). 5993829 (МПК: А61P 35/00, С07K 14/47, публ. 30.11.1999), 6338853 (МПК: А61P 35/00, С07K 14/47). Данные известные способы предусматривают культивирование опухолевых клеток в безсывороточной ростовой среде и выделение из ростовой среды клеточных поверхностных антигенов, которые опухолевые клетки теряют в процессе своего культивирования. После очистки собранные антигены используют в качестве антигенов противоопухолевой вакцины. Преимуществом подобных вакцин является высокое содержание опухолевых антигенов с поверхности клеток, которые являются доступными (не спрятаны внутри клетки) для действия иммунной системы. Недостатками известных способов являются:
- анализ состава получаемой смеси антигенов требует предварительной очистки препарата от компонентов ростовой среды и продуктов жизнедеятельности клеток.
- получение необходимой для вакцинации дозы антигенов подразумевает продолжительное культивирование, что ведет к искажению состава получаемой антигенной смеси и снижению эффективности вакцинации.
В настоящее время сложилась ситуация, когда в традицию нашего бытия необходимо внести компонент, индуцирующий неспецифический клеточный иммунитет высокого уровня - самую древнюю внутреннюю защиту организма от всего чужеродного. Стоит задача повышения эффективности профилактики и лечения заболеваний иммунной системы путем повышение эффективности вакцинации.
В качестве индуктора клеточного иммунитета предлагается специально выведенная путем селекции автором настоящего изобретения линия трихинелл.
В 1987 г. автором данного заявляемого изобретения была выдвинута идея о том, что некоторые паразиты, в частности, нематоды, приносят организму хозяина не только вред, но и значительную пользу как источник антигенов, гормонов и других биологически активных веществ. Они стимулируют и поддерживают на высоком уровне жизненно важные функции организма, в том числе и иммунную систему хозяина. Поскольку паразитизм возник естественным путем, был поддержан отбором, прошел весь путь эволюции и сохранился в наши дни, можно предполагать, что он выступает как обычное и необходимое явление в нормально функционирующем биоценозе, как его составная часть (Бриттов В.А.. паразитизм в природе и его роль в охране гомеостаза хозяина. Успехи современной биологии. М. 1987 г. Т 104. Вып. 1.).
Трихинеллы традиционно относят к биогельминтам, но при ближайшем рассмотрение оказывается, что в жизненной схеме тех и других имеются принципиальные различия. Действительно, при биогельминтозах в каждом последующем хозяине развиваются стадии паразита, отличные от тех, какие развивались у предыдущего. Возбудитель же трихинеллеза в каждом из последовательно включающихся в передачу хозяев проделывает одни и те же фазы своего развития. Иными словами, здесь нет ксенорганизмов, которые обязательно присутствуют в паразитарной системе любого биогельминта. В науке долгое время считалось, что трихинеллы - это просто один из видов червей-паразитов, при этом не могли доказать ни их однообразия, ни деления на виды. Считали, что возбудителем трихинеллеза является один вид Trichinella spiralis (Owen, 1835). Эта нематода была найдена более чем у 100 видов животных на всех континентах, исключая Антарктиду. Постепенно стали накапливаться данные о полиморфности этого вида. В природе не бывает межвидового скрещивания, жизнестойкое потомство дают только особи одного вида. Почти сорок лет назад автор заявляемого изобретения выделил и скрестил виды трихинелл, обитающих в домашней свинье и в диком медведе. Они жили активной половой жизнью, по потомства не давали! Для опытов были нужны трихинеллы из других районов земли. Сейчас описано восемь видов трихинелл, одному из которых, открытому в начале 90-х, итальянские и американские ученые, признавая заслуги автора в изучении трихинелл, присвоили имя, - Trichinella britovi. В связи с описанием новых видов трихинелл возникла необходимость более глубокого изучения каждого вида трихинелл в отдельности и в сравнении с T.spiralis. Нас интересовала иммуногенность трихинелл, и мы провели специальные опыты по этой теме на крысах. В экспериментах использовались 3 вида трихинелл: T.spiralis, T.nelsoni и T.pseudospiralis. Было установлено, что наиболее иммуногенным видом был T.spiralis, a T.pseudospiralis уступал в этом первому виду в 10 раз. Вид T.nelsoni занимал промежуточное положение. Было также выяснено, что на иммуногенность трихинелл оказывают влияние и степень адаптации вида трихипелл к хозяину: чем лучше адаптация вида к хозяину, тем выше иммуногенность и наоборот.
Только что родившаяся личинка нематоды имеет в среднем длину 100 и ширину 4 мкм. Она обладает способностью активно внедряться в мышечное волокно, ибо только внутри него может развиваться. Личинка раздвигает миофибриллы и сразу же выделяет ферменты, приводящие к расплавлению миофибрилл. Волокно теряет поперечную исчерченность. Однако саркоплазма, образовавшаяся на месте разрушенных миофибрилл, остается живой, за счет чего позднее и происходит полная регенерация мышечного волокна. Сарколемма мышечного волокна противостоит разрушающему действию ферментов паразита и является как бы футляром, в котором развивается личинка. В ответ на повреждение мышечное волокно регенерирует, в результате чего синтез белка возрастает в несколько раз. Это способствует лучшему питанию и более быстрому росту личинки. Развитие личинок происходит только в живой мышечной ткани, в тесном взаимодействии продуктов обмена личинки и регенерирующей мышечной саркоплазмы, некроза мышечного волокна, как утверждалось в ранних работах, растущие личинки не вызывают. Редко наблюдаемая гибель отдельного мышечного волокна влечет за собой гибель и резорбцию развивающейся в нем личинки. Также и со смертью хозяина развитие личинок немедленно прекращается. Рост личинок сначала происходит больше в толщину, чем в длину. На 13-ый день после заражения личинки становятся более крупными, но еще прямыми. На 17-20-ый день длина личинок достигает 900 мкм. Они уже свернуты, а кутикула приобретает непроницаемость и стойкость по отношению химических веществ. Вокруг личинок начинается осаждение белка, из которого формируются стенки капсулы. 18-дневные личинки T.nativa, 19-дневные T.spiralis и 20-дневные T.britovi становятся инвазионными, то есть способными вызвать заражение восприимчивых животных и совершать новый биологический цикл. С 20-22-го дня после заражения вокруг личинок капсулообразующих видов трихинелл начинает формироваться капсула. Еще Лейкарт считал, что в образовании капсулы паразит играет активную роль. Но только после описания T.pseudospiralis окончательно прояснилось, что личинки сами строят капсулы из материала хозяина и собственного строительного белка и ферментов. Главным структурным элементом стенки капсулы является коллаген. Вместе с личинкой оболочка капсулы отграничивает часть саркоплазмы с крупными мышечными ядрами и митохондриями. С внешней стороны капсулы оплетаются кровеносными сосудами и нервными волокнами. Таким образом, при трихинеллезе происходит ярко выраженная реакция сосудистых и нервных элементов в поперечно-полосатой мускулатуре. Эта реакция проявляется в раздражении и образовании новых приборов в виде капилляров и тонких нервных волоконец. Капсуле, как и всякой иной живой ткани, кровеносная система и иннервация необходимы для обеспечения нормальной жизнедеятельности. Ведь только в этом случае возможно длительное сохранение жизнеспособности трихинелл. Поэтому, возникновение вокруг капсулы сети кровеносных сосудов и нервных волокон следует рассматривать как образование новых морфологических структур. Капсула вокруг личинок трихинелл представляет собой полупроницаемую мембрану. Через сосудистую сеть вовнутрь капсулы проникают питательные вещества и выводятся продукты обмена личинки. Синтез белка может происходить до тех пор, пока в капсуле сохраняется живая мышечная цитоплазма с ядрами и митохондриями. С гибелью последних, капсула, с заключенной в ней личинкой, становится в организме хозяина чужеродной и подвергается клеточно-ферментативной резорбции. Поскольку внутри капсулы постоянно осуществляются обменные процессы и синтезируются белки, часть их накапливается в стенках капсул. Постепенно они утолщаются, а в стенках старых капсул откладываются соли извести. В полностью обезызвествленных капсулах личинки погибают из-за голодания и отравления продуктами метаболизма. Наиболее толстостенные капсулы формируются личинками T.nativa. Личинка T.spiralis и T.nelsoni не образуют сильно толстостенных капсул, а личинки трихинелл Экваториальной Африки строят их медленнее, чем другие капсулообразующие виды. Личинки T.pseudospiralis совсем не умеют инкапсулироваться.
Эти данные были учтены при выведении вакциной линии трихинелл. Такая линия трихинелл была создана обычными методами селекции, проверена на животных, потом на себе. Было установлено, что вакцинная линия трихинелл не содержит никаких патогенных микроорганизмов (кроме симбиотических стафилококков), обладает высокой иммуногенностью и сниженной патогенностью по сравнению с дикими изолятами трихинелл. Для выведения методами селекции новой линии трихинелл из нематод рода Trichinella Railliet (1895), которую используют для получения вакцины для иммунизации животных и человека были определены четыре вида: T.spiralis, T.nativa, T.pseudospiralis, T.britovi. Они идентичны по генотипу. Между всеми четырьмя видами вырабатывается перекрестный иммунитет.
Способ получения вакцины на основе живых личинок нематод рода Trichinella Railliet (1895) для иммунизации животных и человека, включает отбор линии трихинелл для получения вакцины, которая обладает более низкими патогенными и более высокими иммуногенными свойствами путем заражения лабораторных животных личинками двух различных видов, которые выбирают из следующих четырех: T.spiralis, T.nativa, T.pseudospiralis и T.britovi. В качестве лабораторных животных лучше всего использовать мышей. У грызунов наибольшим скоплением личинок трихинелл являются жевательные мышцы. Разница в интенсивности поражения мышц личинками может достигать десятикратной и даже более. Но при умеренной инвазии, а тем более при сильной, личинки трихинелл легко обнаруживаются в любой группе скелетных мышц.
После заражения мышей, контролируют эмбриогенез и через 1,5-2 месяца отделяют мышечную ткань зараженных мышей и выделяют инвазионные личинки, которые используют для повторного заражения мышей дозой, составляющей 200-300 личинок, после чего определяют степень заражения, по которой судят об иммуногенности и патогенности линий трихинелл, при этом для изготовления вакцины используют ту линию трихинелл, заражение которой приводило к наиболее легкой форме заболевания лабораторного животного, а повторное заражение не приводило к заболеванию. Эту, по сути, живую вакцину, мы испытали на животных, потом на себе и ближайших соратниках. Позднее нашему примеру последовали лица, страдающие вторичным иммунодефицитом и как следствие, различными болезнями желудочно-кишечного тракта, опорно-двигательного аппарата, дыхательными, кроветворными, генеративной и мочеполовой систем. Среди них: преждевременное старение, язва желудка и двенадцатиперстной кишки, гайморит, бронхиальная астма, мастопатия, миома матки, эндометриоз, женское бесплодие, невроз, гипертензия, дизбактериоз, энурез, импотенция, хронический миелоидный лейкоз, идеопатическая тромбоцитопеническая пурпура, туберкулез, ВИЧ-инфекция, рак 1 и 2 стадии разных локализаций и др. Вакцина назначалась внутрь одномоментно. К достоинствам метода иммунизации такой вакциной относятся: высокая эффективность, безопасность, простота использования, дешевизна технологии. (Способ лечения и профилактики и вакцина запатентованы в Российской Федерации 20 августа 2001 года. Патент на изобретение №2172182). Благодарные пациенты назвали эту вакцину - вакциной Бритова, После перорального приема вакцины личинки внедряются в слизистую оболочку тонкого отдела кишечника, где превращаются в имаго, причем самки рождают личинок, которые с током крови разносятся по организму, где поселяются в скелетных мышцах. Имаго и личинки выделяют во время своего развития сложный комплекс антигенов. В ответ в организме человека или животного, одновременно с формированием моноиммунитета против трихинеллеза, укрепляется неспецифическая резистивность (за счет клеточного иммунитета) и организм приобретает долговременной иммунитет от других нарушений функционирования иммунной системы.
Непосредственная вакцинация живыми трихинеллами показала высокую эффективность за счет восстановления функции клеточного иммунитета. Лечебный эффект был получен более, чем у 90% пациентов и ни у кого не было каких-либо негативных последствий, в том числе трихинеллеза, т.к. трихинеллы, после выполнения в организме своей функции по стимулированию иммунитета изгонялись трихинеллоцидными препаратами.
Однако, следует отметить, что недостатками данного способа является то, что требуется вводить живые трихинеллы, которые имеют ограниченный срок использования и при длительном хранении в неестественной для них среде погибают. Недостатком является также то, что свое лечебное воздействие препарат начинает проявлять спустя месяц, а при воздействии на злокачественные опухоли фактор времени имеет существенное значение. Поэтому, если эффективность лечения больных с I-II стадиями рака достигает 80%, то при III стадии - менее 7%, а при IV стадии излечение не наступает, хотя увеличивается продолжительность жизни.
В недавнее время появилась возможность начать эксперименты по лечебному воздействию молока, полученного от лактирующих животных, предварительно прошедших иммунизацию вакциной, полученной вышеописанным методом и согласно способу лечения и профилактики, описанному в указанном выше патенте. Работая много лет с мышами и крысами, мы заметили, что умеренно зараженные трихинеллами самки приносили и выкармливали больше детей, чем матери незараженные. Несколько лет назад на Дальнем Востоке России появилась первая храбрая женщина, которая решила сделать все, лишь бы восстановилось здоровье ее грудного младенца, который часто болел и плохо развивался. Она сама педиатр, лечила его, по болезнь возвращалась снова. Мамаша узнала о вакцине, созданной автором заявляемого изобретения, и выпила ее, в результате чего ее молоко стало целебным, и ребенок перестал болеть. У другой женщины больному ребенку было несколько лет и его лечили молоком от иммунизированной козы. Известно, что молоко является единственным продуктом питания и иммунной защиты молодняка млекопитающих в первый период жизни. Тем не менее, практика животноводства показывает сравнительно высокую восприимчивость молодняка к различным инфекциям и инвазиям, создавая при этом дополнительные трудности в воспроизводстве стада. С целью повышения иммунного статуса подрастающего поколения животных мы использовали целебное молоко коров, иммунизированных вакциной из трихинелл. Вакцинированные коровушки должны приносить больше телят на радость хозяевам и эти телята будут реже болеть, поскольку будут вскормлены молоком особой целительной силы. Методика иммунизации коров аналогична, как при иммунизации человека. Корове скармливали вакцину, состоящую из живых личинок линии трихинелл, полученной путем скрещивания двух различных видов из четырех: T.spiralis, T.nativa, T.pseudospiralis, T.britovi с последующим отбором по более низким патогенным и более высоким иммуногенным свойствам, в дозе 5000-20000 личинок. В результате иммунной реакции коров на вакцину, их кровь и молоко приобретают целебное свойство в виде иммуноглобулина и особенно иммунокомпетентных клеток. Начиная с 12 дня после принятия вакцины, проводят курс антитрихиллезного лечения. После того, как организм животного-продуцента приобретает долговременный иммунитет от нарушений функционирования иммунной системы, приблизительно через 1 месяц после принятия ею вакцины, у него берут молоко, которое принимают по 1 л ежедневно.
Поскольку пассивный иммунитет быстро гаснет, целебное молоко приходиться принимать регулярно несколько педель или даже месяцев подряд, пока не сформируется собственный иммунитет подобного рода. Естественно, такое молоко полезно не только больным людям, но и здоровым, так как оно обладает профилактическими свойствами. У этого молока обнаружилась любопытная особенность - при прямой вакцинации результаты приходится ждать несколько месяцев, а иммунное молоко дает эффект почти сразу или в течение нескольких дней. Поскольку иммунное молоко действует сходным образом, как и прямая иммунизация, то последствия могут быть самыми благоприятными. Совсем недавно, в крае, где жил Святой Преподобный Серафим Саровский (юг Нижегородской области), появилась первая иммунизированная корова, молока стало много и лечить свои болячки стали также и взрослые люди. Появились еще иммунизированные коровы. Ни козе, ни корове храбрости принять вакцину не потребовалось, но боялись их хозяева - ведь гибель буренки в наше непростое время больно ударила бы по благосостоянию крестьянской семьи. Владельцы первых четырех иммунизированных коров уже убедились, что зря боялись за жизнь своих кормилиц, подвергаемых иммунизации. Появился спрос на целебное молоко. Т.о. такое молоко является средством для лечения и профилактики заболеваний иммунной системы и обеспечивает оздоровление организма. Применение его способствует: развитию здоровья в целом; профилактики заболеваний; коррекции баланса физических и психических сил человека; компенсации физических и психических усилий человека; восстановлению утраченных функциональных возможностей организма (реабилитация). После того, как были получены положительные результаты на животных, целебное молоко стали потреблять и пациенты, страдавшие различными хроническими болезнями, в том числе с диагнозами: туберкулез, язва желудка и 12-перстной кишки, простатит, импотенция, рак различной локализации (3-4 стадии), меланома 3-4 стадии и рядом других недугов. Все больные без исключения говорили об улучшении своего состояния после приема целебного молока в течение трех-четырех недель. Они упоминали о повышении активности, снижении или исчезновении болей, приливе сил и увеличении трудовых возможностей, возрастании потенции у мужчин и женщин, уменьшении объема патологических очагов в органах и тканях. Четыре пациента с язвой желудка и 12-перстной кишки, простатита и импотенции, считали себя выздоровевшими. Пациенты со злокачественными новообразованиями отмечали прилив сил и обрели надежду на выздоровление. У них исчезла замкнутость, апатия, улучшились аппетит и сои, расширился интерес к окружающему миру, они стали чаще улыбаться.
Благотворное влияние иммунного молока на телят и больных людей объясняется несколькими факторами, но главные из них это обогащение желудочно-кишечного тракта симбиотической микрофлорой (молочнокислыми бактериями, микрококками, коринобактериями, стрептококками, стафилококками и множеством других микробов) и воздействием пассивного иммунитета, особенно его клеточной части. Многие симбиотические комплексы живут у широкого круга животных, выполняя у них одинаковую функцию. Например, дрожжи успешно функционируют у насекомых, пресмыкающихся, птиц и млекопитающих, в том числе у человека, инфузории обслуживают всех жвачных, бифидо- и молочнокислые бактерии - у подавляющего большинства млекопитающих. Самые необходимые симбионты (чаще бактерии и грибы) у человека и других видов млекопитающих передаются новому поколению непосредственно от матери во время кормления молоком. Основная масса симбиотического населения кишечника непосредственно участвует в пищеварении путем синтеза многообразных пищеварительных ферментов, а также вырабатывают различные аминокислоты, некоторые жирные кислоты, витамины, антибиотики, стимуляторы роста и другие гормоны, строительный и пищевой белок и т.п. Симбиотическая микрофлора поддерживает кислотно-щелочное равновесие, что важно для нормальной работы организма. Симбиотическое сообщество трудится как бы по конвейерной системе: одни микробы разлагают целлюлозу, другие утилизируют крахмал, третьи - прочие продукты. Следующие группы микроорганизмов расщепляют эти вещества до аминокислот или мелкодисперсных белков, простых сахаров, синтезируют из них новые белки, которые затем всасываются в кровь или используются организмом на месте. Поэтому, если какой-то блок симбионтов выпадает из сообщества, может нарушиться вся его функция. Такое явление особенно пагубно сказывается при воспитании молодняка сельскохозяйственных животных в зимний период, когда симбиотическая микрофлора поступает в организм молодняка преимущественно с молоком, тогда как летом она может пополняться еще с травой. У человека симбиотическая микрофлора кишечника формируется с еще большим трудом из-за традиции термической обработки пищи и воды. Кроме того, бесконтрольное использование антибиотиков и дурные привычки (употребление алкоголя, табака и наркотиков) усугубляет проблему. Специалисты считают, что в 68% случаев применение антибиотиков не соответствует показаниям. Около 20% госпитализированных больных лежат с лекарственными осложнениями. По этим же причинам (стерилизация пищи, бесконтрольное использование антибиотиков и дурные привычки) обуславливается стабильный иммунодефицит, на фоне которого расцветает множество болезней, в том числе злокачественные образования. При сложившейся ситуации крайне необходимо введение в практику ветеринарии и особенно медицины корреляционного фактора, который бы смягчил, если не устранит, пагубную тенденцию. В качестве такого фактора мы и предлагаем молоко коров иммунизированных вакциной из трихинелл.
Из предшествующего уровня технике известны способы лечения и профилактики заболеваний иммунной системы, например, методы пассивной иммунотерапии, в частности, серотерапии, при которой, в отличие от вакцинации, в организм вводятся специфические антитела, и, следовательно, организм практически немедленно становится в той или иной степени резистентным к определенной инфекции. Антитела - лечебно-профилактические иммунные сыворотки крови (или выделенные из нее иммуноглобулины, гаммаглобулины) переболевших и выздоровевших животных (реконвалесцентов) или специально иммунизированных животных-продуцентов. Метод серотерапии наиболее близок к заявляемому. Лечебный эффект основан на явлении пассивного иммунитета - обезвреживании микробов (токсинов) антителами (антитоксинами), содержащимися в сыворотках. Иммунные сыворотки применяют при многих инфекциях как с целью экстренной иммунопрофилактики (при непосредственной угрозе заболевания), так и с целью иммунотерапии. Существуют антимикробные и антитоксические сыворотки. С целью иммунотерапии антитоксические сыворотки применяются наиболее часто. К антитоксическим сывороткам относятся: противодифтерийная, противостолбнячная, противогангренозная, противоботулиническая сыворотки. Кратность приема и дозы подбирают в зависимости от заболевания, возраста, пола, состояния пациента, наличия других заболеваний и целей иммунотерапии. Сыворотки иммунные применяют при лечении дифтерии (преимущественно в начальной стадии болезни), ботулизма, при укусах ядовитых змей; гамма-глобулины - при лечении гриппа, сибирской язвы, столбняка, оспы, клещевого энцефалита, лептоспироза, стафилококковых инфекций (особенно вызванных антибиотикоустойчивыми формами микробов) и других заболеваний. Серопрофилактику проводят против столбняка, анаэробных инфекций, дифтерии, кори, бешенства, сибирской язвы, ботулизма, клещевого энцефалита и др. При ряде инфекционных болезней с целью серопрофилактики одновременно с сывороточными препаратами используют и другие средства: антибиотики при чуме, анатоксин при столбняке и др. Введение сыворотки осуществляют внутривенно, внутримышечно или перорально. Введение сыворотки, полученной из крови животных, в отдельных случаях может вызвать сывороточную болезнь и такое грозное осложнение, как анафилактический шок. Для предупреждения сывороточной болезни во всех случаях сыворотку вводят по специальной методике с предварительной кожной пробой (по методу Безредки поэтапно: в первый раз - 0,1 мл, через 30 мин - 0,2 мл и через 1 ч всю дозу). (Г. Лолор-младший, Т. Фишер, Д. Адельман (ред.) Клиническая иммунология и аллергология Перевод с английского: М.В. Пащенков, Н.Б. Гамалея. Редакторы перевода: к.м.н. Е.И. Образцова, В.М. Нечушкина, д.м.н. А.С. Апт. Москва, «Практика», 2000)
Преимущество иммунных лечебных сывороток, полученных из крови животных, в том, что интенсивная иммунизация животных позволяет достичь высокой концентрации антител, кроме того, нет ограничений в подборе продуцентов. Способ получения лечебных сывороток, основанный на взятии крови у иммунизированного животного-продуцента, наиболее близок к заявляемому. Данные сыворотки получают из крови копытных животных (волов, мулов, ослов, овец, чаще лошадей, т.к. от них можно получить много крови), подвергнутых интенсивной (многократной) иммунизации анатоксином или другим антигеном (гипериммунизации). Иммунизацию осуществляют многократным, через определенные интервалы, введением инъекций с возрастающими дозами антигенов, которые вызывают образование антител. Нарастающие дозы антигенов определяют по утвержденным производственным схемам, отличающимся продолжительностью иммунизации, интервалами между циклами иммунизации, дозами для каждого цикла введения и реакцией продуцента на введение антигена. Когда тир антител достигает максимума, у животных периодически берут кровь и получают из нее сыворотку. Чаще это делают на 10…14-е сутки после введения продуценту последней дозы антигена. Из крови выделяют сыворотку общепринятыми методами. В настоящее время неочищенные сыворотки практически не применяют: их концентрируют и подвергают очистке от балластных веществ обработкой ферментами, диализом («Диаферм»), либо другими методами. Силу антитоксических сывороток измеряют в международных единицах (ME) по способности нейтрализовать определенную дозу токсина. (."Биотехнология", под редакцией академика Е.С. Воронина, изд. ЗАО ГИОРД, 2005 г., Шигина 10. В. Клиническая иммунология: Учеб. пособие. - М.: Издательство РИОР, 2006. - 72 с).
Недостатками известных способов лечения и профилактики заболеваний иммунной системы с помощью иммунных сывороток, полученных описанным выше способом, является узкий спектр терапевтической эффективности, связанный с тем, что в организм вводят антитела, избирательно воздействующие на определенную инфекцию (против какого-то одного возбудителя) и приводящих к формированию гуморального иммунитета, который не обеспечивает в полной мере защиту организма от всего чужеродного.
Главной причиной ряда болезней является утрата организмом принципа саморегуляции. Основной задачей при оказании помощи больным является восстановление природного принципа саморегуляции путем восстановления клеточного иммунитета.
Техническим результатом заявляемого способа является повышение его эффективности за счет формирования собственного иммунитета.
Указанный технический результат достигается за счет того, что в способе получения сыворотки из крови животного, включающем иммунизацию животных-продуцентов, в качестве которых используют копытных животных, и забор крови животного при достижении максимального числа антител с последующим отделением сыворотки общепринятыми методами и ее стерилизации, иммунизацию животных осуществляют путем орального введения вакцины, состоящей из живых личинок линии трихинелл, полученной путем скрещивания двух различных видов из четырех: T.spiralis, T.nativa, T.pseudospiralis, T.britovi с последующим отбором по более низким патогенным и более высоким иммуногенным и свойствам, в дозе, зависящей от веса животного-продуцента и составляющей от 5000 до 20000 живых личинок, после чего животному-продуценту, начиная с 10-14 дня после введения препарата, производят обычную терапевтическую коррекцию, как при трихинеллезе, а забор крови осуществляют через 30 дней после введения препарата.
В способе профилактики и лечения заболеваний иммунной системы животного и человека с помощью иммунной сыворотки, включающем применение сыворотки, полученной из крови иммунизированных животных-продуцентов, иммунизацию которых осуществляют вакциной, состоящей из живых личинок линии трихинелл, полученной путем скрещивания двух различных видов из четырех: T.spiralis, T.nativa, T.pseudospiralis, T.britovi с последующим отбором по более низким патогенным и более высоким иммуногенным и свойствам, а полученную сыворотку человеку вводят по схемам: либо перорально, начиная с 0,05 мл за один прием, 3 - раза в день и доводят до 1,2 мл, прибавляя за каждый прием по 0,05 мл, а затем в обратном порядке по убыванию, либо в виде инъекций парентерально по 1-2 мл с перерывом в 2-а дня, при этом кратность приема по первой схеме, кратность и дозы инъекций по второй схеме подбирают индивидуально с учетом возраста, сопутствующих болезней и состояния больного, а животному - по 10-15 мл в виде инъекций трехкратно через 5-ть дней.
Осуществление иммунизации животных-продуцентов вакциной, основным ингредиентом которой являются живые личинки специально выведенной линии нематод рода Trichinella Railliet, 1895, полученной путем скрещивания двух различных видов из четырех: T.spiralis, T.nativa, T.pseudospiralis, T.britovi с последующим отбором по более низким патогенным и более высоким иммуногепным и свойствам, позволяет образовать в организме животного сложный комплекс антигенов, в ответ на которые организм животного приобретает долговременной иммунитет от нарушений функционирования иммунной системы, а его кровь - полезные свойства в виде большого количества иммуноглобулинов и иммунокомпетентных клеток. При этом данная линия является более иммунногенной и менее патогенной, что облегчает процесс адаптации организма после вакцинации.
Доза вакцины, составляющая от 5000 до 20000 живых личинок, в зависимости от веса животного была выбрана экспериментально и является оптимальной иммунизирующей дозой. После введения этой дозы животному, трихинеллы выделяют в его организме к 10 дню достаточное количество антигенов, необходимых для формирования в крови животного-продуцента требуемого для получения эффективной сыворотки количества антител - иммуноглобулинов и иммунокомпетентных клеток.
Пероральное введения вакцины животному необходимо для того, чтобы личинки внедрились в слизистую оболочку тонкого отдела кишечника, где благоприятные условия для их размножения, при этом рожденные личинки с током крови разносятся по организму и поселяются в скелетных мышцах, разрушая только миофибриллы, которые после гибели личинок регенерируют.
Осуществление животному-продуценту обычной терапевтической коррекции, как при трихинеллезе, начиная с 10-14-ого дня после введения ему препарата, требуется для выведения из организма животного личинок трихинелл, которые сделали свое дело, выделив антигены.
Осуществление забора крови животного - продуцента через 30 дней после введения вакциныа, позволяет получить кровь для отделения сыворотки с наиболее полезными свойствами (максимальное число гаммаглобулинов и иммунокомпетентных клеток), что также было определено экспериментально. Однократное кровопускание в дозах, не превышающих 1% от массы тела животного, не вызывает заметных гемодинамических, гемоцитологических и биохимических сдвигов в ближайшие сроки от момента взятия крови. В то же время установлено, что двукратное кровопускание стимулирует образование иммуноглобулинов М (IgM), плазмоцитарную реакцию лимфоидных органов, влияет на уровень гамма- и бета-глобулинов, повышает синтез пропердина, лизоцима и бета-лизинов, увеличивает бактерицидность сыворотки крови и фагоцитарную активность лейкоцитов, повышает превентивные свойства сыворотки, а также сопротивляемость организма инфекции. Тотальное обескровливание проводят тогда, когда решается вопрос о прекращении использования животных как продуцентов. Обычно это делают в момент максимального накопления антител и появления тенденции снижения их синтеза.
Заявляемая схема введения сыворотки подобрана экспериментально после многолетних исследований и наблюдений. Поскольку молекулы, составляющие иммунитет, - низкомолеулярные, то не обязательно вводить сыворотку крови в кровь больному - достаточно ее выпить, при этом низкомолекулярные иммунные компоненты сыворотки крови животного проникают через стенку пищеварительного тракта в организм больного неповреждеными, и оказывают свое иммунно-укрепляющее действие. Однако при некоторых заболеваниях и состояниях больного целесообразней сыворотку вводить парентерально в виде инъекций. Преимущества парентерального пути введения в организм заключаются: в возможности введения сыворотки больному, находящемуся в состоянии, когда лекарство невозможно ввести через рот, отсутствие воздействия пищеварительных ферментов, что имеет место при пероральном приеме лекарств, отсутствие необходимости коррекции вкуса, запаха, цвета.
Выбор доз для перорального и парентерального введения сыворотки был сделан экспериментально и обеспечивает организму больного восстановление в короткий срок функции иммунитета с последующим формированием собственного, что позволяет говорить об эффективности способа. Восстановление функции иммунной системы способствует профилактике и излечению многих болезней, повышая уровень здоровья и трудоспособности, улучшает качество жизни.
Возможность практического использования предлагаемого способа профилактики и лечения заболеваний иммунной системы с помощью молока, иммунной сыворотки и способа получения такой сыворотки иллюстрируется примерами лечения и изготовления сывороток с использованием полной совокупности заявляемых признаков патентной формулы.
Пример 1
Под опытом находились 23 теленка в возрасте от 1 до 4 дней, 12 из которых составляли подопытную группу и 11 контрольную. Все телята получены от не иммунизированных коров. Условия содержания и кормления обеих групп были аналогичными и соответствовали общепринятым нормам. Телятам подопытной группы давали молоко от иммунизированных коров, телятам контрольной группы - от не иммунизированных. Наблюдение за телятами продолжалось в течение трех месяцев. За весь срок наблюдений телята подопытной группы хорошо развивались, не болели, тогда, как в контрольной группе 3 теленка заболели и два из них погибли.
Пример 2
Данный пример показывает на оздоровление - реабилитацию организма больной К., которая страдала из-за повышенного давления, сахарного диабета, была прооперирована по поводу опухоли в левой молочной железе, однако следом обнаружили опухоль в правой. За 2-а месяца приема молока иммунизированной коровы, у нее: снизилось артериальное давление с 220/100 до 140/60, уменьшился сахар в крови с 15 единиц до 8,7, а в моче с 4,5 до 0,5%, миома матки с 12 недель до 9-10, спала отечность ног, лица, уменьшилась опухоль в правой молочной железе и стала мягче (заключение врача-онколога).
Пример 3
Мужчина, 52 года, давно страдал язвой желудка и импотенцией. При обострении язвенной болезни, что происходило часто, получал лечение в стационаре. При очередном обострении начал пить молоко иммунизированной коровы по 0,5 литра в день в течение 1,5 месяцев. Обострение прошло, и в течении уже 3-х лет рецидивов язвенной болезни не было. По его словам, прошла и импотенция. Данный пример показывает на улучшение состояния здоровья и восстановление утраченных функциональных возможностей организма.
Пример 4
Мужчина, 1950 г.р., заболел в августе 2009, повысилась температура и не спадала, лечение не помогало. Направили в тверской областной онкологический диспансер. Диагноз: опухоль в левом легком, метастазы - в правом. Прошел курс химиотерапии, операция была противопоказана в виду обширности опухоли. С декабря 2009 начал пить молоко по 1 литру в день, почувствовал себя лучше, в последствии вакцинировался. В настоящее время жив, работает.
Пример 5
Больной К., 1951 г. рождения, из Нижнего Новгорода с диагнозом - аденокарцинома прямой кишки, третья стадия. Анамнез: в ночь с 24 на 25 февраля 2010 г. практически не спал из-за острой боли в животе (спазмы, бурление). В ночное время диарея до 10 раз. С утра 25 февраля 2010 г. до 14.00 дня беспокоил живот, появился отек обеих ног, аппетит отсутствовал. Цвет кожного покрова, в том числе лица, - серый, температура - нормальная, настроение - подавленное. В 14.40 25 февраля по просьбе больного и в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации 1964 г. (с дополнениями от 2008 г.) больному ввели внутримышечно инъекцию сыворотки (1 мл). Через 2-а часа боли в животе прекратились и больной задремал. Через полчаса появился легкий озноб, который прекратился через 20 мин. Повысилась температура тела до 37,3°C. Вечером того же дня диарея и бурление в животе прекратились и больной уснул глубоким сном. Утром 26 февраля, как рассказывает пациент, он проснулся с ощущением легкости во всем теле. Как будто вчера был совершенно здоров, он почувствовал сильный голод, самостоятельно сварил себе завтрак, поел и снова уснул. Через двое суток от первой инъекции, было введено еще 2 мл той же сыворотки, а двое суток спустя - еще такую же дозу. За период лечения сывороткой у больного только один раз повышалась температура до 39,0°C. Но вскоре опустилась до нормы. С 3 марта 2010 г. состояние больного стабилизировалось. Он полностью перешел на самообслуживание. Сам готовил себе пищу, убирал квартиру. Для восстановления сил и поддержки иммунитета больному было рекомендовано принимать в качестве пищи по 1-2 сырых яйца. Сочетание яиц и сыворотки способствует быстрому восстановлению функции иммунитета, особенно его клеточной части и переводит организм больного на принцип саморегуляции - изначально подаренный нам природой.
Пример 6
Республика Мордовия, Ельниковская ветеринарная станция по борьбе с болезнями животных. В настоящее время в хозяйствах Ельниковского района распространены желудочно-кишечные и вирусные респираторные инфекции молодняка крупного рогатого скота, наносящие огромный экономический ущерб животноводству, приводя к падежу или снижению скорости роста больных телят, затратам на лечение, диагностические и профилактические мероприятия. Отечественные и зарубежные исследователи считают, что одной из причин недостаточной защищенности молодняка в первые месяцы жизни к возбудителям этих заболеваний являются условно-патогенная микрофлора и низкий уровень колострального иммунитета. Болезни телят обусловлены не только действием разных инфекционных агентов, но и множеством способствующих факторов, включающих генетическую предрасположенность, нарушение санитарно-гигиенических норм содержания и кормления, воздействия стрессов. Респираторные и желудочно-кишечные болезни, первопричиной которых являются вирусы, могут протекать в виде моно - или смешанных инфекций и осложняться вторичной микрофлорой. Наиболее эффективным средством профилактики и лечения считаем применение сыворотки от коров, иммунизированных трихинеллами. Под опытом находились 23 теленка в возрасте от 10 до 40 дней, 12 из которых составляли подопытную группу и 11 - контрольную. Условия содержания и кормления обеих групп были аналогичными и соответствовали общепринятым нормам. Телятам подопытной группы вводили сыворотку от иммунизированных коров в количестве 10-15 мл один раз в пять дней - трехкратно, телятам контрольной группы - по 10-15 мл. один раз в пять дней- трехкратно - от не иммунизированных коров. Наблюдение за телятами продолжалось в течение шести месяцев. За весь срок наблюдений телята подопытной группы хорошо развивались, не болели, тогда, как в контрольной группе 3 теленка заболели и два из них погибли. За 2011 г. было получено от коров 96 телят, которым давали сыворотку от иммунизированных коров. Телята практически не болели и давали хорошие привесы.
Пример 7
Сыворотку от иммунизированных коров употребляли пациенты, страдавшие различными хроническими болезнями, в том числе с диагнозами: туберкулез, язва желудка и 12-перстной кишки, простатит, импотенция, гепатит, панкреатит, рак различной локализации (3-4 стадии), меланома 3-й стадии и рядом других недугов. После приема сыворотки от иммунизированных коров по схеме: одна капля утром, в обед - две, вечером - три, итак, до 24 капель, затем снижая в обратном порядке до одной капли, все больны, без исключения, говорили об улучшении своего состояния. Сыворотку применяли в течение от трех месяцев до одного года. Они упоминали о повышении активности, снижении или исчезновении болей, приливе сил увеличении трудовых возможностей, возрастании потенции у мужчин и женщин, уменьшении объема патологических очагов в органах и тканях. Пациенты со злокачественными новообразованиями отмечали прилив сил и обретали надежду на выздоровление. У них исчезла замкнутость, апатия, улучшились аппетит и сон, расширился интерес к окружающему миру, они стали чаще улыбаться.
Пример 8 (получение сыворотки из крови коровы).
Предварительно готовят препарат из личинок специально выведенной путем селекции линии трихинелл, вываренных из скелетных мышц животных (крыс). Т.к. не существует напрямую количественных характеристик токсичности и активности трихинелл и их личинок, то отбор линии особей, обладающих низкими патогенными и высокими иммуногенными свойствами, производится экспериментально путем назначения иммунизированным животным проверочной дозы трихинелл. Для изготовления препарата используют ту линию трихинелл, заражение которой приводило к наиболее легкой форме переболевания крысы, а повторное заражение не приводило к заболеванию. Методика иммунизации коров аналогична, как при иммунизации человека. Животного иммунизируют путем орального (препарат дают с кусочком хлеба) введения препарата. Количество вводимого препарата составляет 15-20 тыс. живых личинок. Лечение животного начинается на 12-14 день после введения ему препарата. Вводится в/м ивермаг из расчета 1 мл на 50 кг, затем шесть дней подряд дается перорально альбен из расчета 1 таб. на 50 кг. Взятие крови для приготовления сыворотки проводится через 30 дней после вакцинации. В промышленном производстве готовится множество различных сывороток. Технологические приемы приготовления их в общих чертах одинаковы. В то же время для приготовления отдельных сывороток имеются свои технологические особенности производства, которые для каждой сыворотки оговорены в соответствующей научно-технической документации.
При приготовлении данной сыворотки кровь брали от коров не ниже средней упитанности, живой массой 400-500 кг из яремной вены в количестве 1000 мл от каждого животного. Место введения иглы выстригают, моют с мылом и дезинфицируют настойкой йода. Кровь берут в стерильные бутылочки с соблюдением всех правил асептики. Перед стерилизацией в бутылочку наливают 50 мл физиологического раствора на один литр крови, после этого отверстие бутылочки закрывают двойным слоем бумаги, каждый из них перевязывают пергаментом. Перед введением иглы в яремную вену, верхний слой бумаги приподнимают, а нижний прокалывают стеклянным наконечником резинового шланга. В момент взятия крови верхним слоем бумаги прикрывают нижний слой бумаги со стеклянным наконечником, предотвращая возможность попадания воздушной микрофлоры. По окончании крововзятия и изъятия наконечника из бутылочки, верхний слой бумаги плотно накладывают на нижний и перевязывают шпагатом. Перед наполнением бутылочек кровью, стенки должны быть увлажнены находящимся в них физ. раствором. Во избежание образования пены, кровь спускают по стенкам сосуда. Взятую кровь ставят для лучшего свертывания в теплое помещение при температуре +25С на 5-6 часов. Через 6 часов сгусток крови обводится фламбированной стеклянной палочкой, затем сосуды с кровью помещают на двое суток в холодильник при +4С. После отстоя сыворотку сливают в заранее стерилизованную вымеренную бутылочку через стерильную воронку с соблюдением всех правил получения стерильной сыворотки. Консервирование сыворотки производится фенолом из расчета: на каждые 900 мл сыворотки добавляют 100 мл 5% раствора фенола. Конечное содержание фенола в сыворотке должно быть 0,5%. По окончании карболизации раствор тщательно взбалтывают в течение 10 минут. Сыворотка крови крупного рогатого скота пригодна для применения в течение 6 месяцев со дня ее изготовления при условии хранения при температуре от 2 до 10 градусов С.
Пример 9 (получение сыворотки из крови козы) Предварительно готовят препарат из личинок специально выведенной путем селекции линии трихинелл как и в предыдущем примере. Животного иммунизируют путем орального (препарат дают с кусочком хлеба) введения препарата. Количество вводимого препарата составляет 5-6 тыс. живых личинок. Лечение животного начинается на 10-12 день после введения ему препарата. Вводится в/м ивермаг из расчета 1 мл на 50 кг, затем шесть дней подряд дается перорально альбен из расчета 1 таб. на 50 кг. Взятие крови для приготовления сыворотки проводится через 30 дней после вакцинации. Можно воспользоваться, например, отечественным методом, известным под названием «Диаферм-3» (диализ, ферментация), который был разработан в 1954 г. и затем усовершенствовался. Метод «Диаферм-3» включает восемь стадий:
- стадия ферментативного гидролиза сывороточных белков пепсином в течение 1 ч при рН 3,2 и 1 ч при рН 4,2 при температуре 22-25°C;
- стадия термоденатурации в течение 45 мин, при рН 4,3 и 58°C вприсутствии 14-14,5% сульфата аммония [(NH4)SO4];
- стадия высаливания активных глобулинов сульфатом аммония(34%) при рН 7,1;
- стадия стерилизующей фильтрации;
- стадия диализа и дополнительной очистки от балластных бел ков в их изоэлектрической точке при рН 5,2-5,6 в присутствии хлороформа (CH Cl3);
- стабилизация очищенной сыворотки в течение 3 месяцев;
- повторная стерилизующая фильтрация
- расфасовка.
Использование изобретения в биотехнологии позволит массово иммунизировать животных, оздоровить их и повысить поголовье, а также организовать массовый выпуск иммунных сывороток для лечения и профилактики заболеваний иммунной системы. А наряду с лечением сывороткой можно использовать и молоко, масло, сыворотку, улучшенные в иммунологическом плане. Такой подход к лечению тяжелобольных дает хорошие результаты. К тому же, способ лечения сывороткой можно сочетать со специфическими лекарственными средствами. Но не с химиотерапией. Первейшей задачей врачей является борьба с иммунодефицитом. Для этих целей и предлагается сыворотка из крови коров, иммунизированных биопрепаратом из трихипелл. Она оказалась высоко эффективным средством в борьбе с болезнями у человека и животных.
Документы, цитированные в отчёте о поиске3
Номер документа Дата публикации Авторы Название
RU96123906A 1999.03.20 Бритов В.А. СПОСОБ И ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ИММУНОДЕФИЦИТОВ, НАПРИМЕР РАКА
RU2172182C1 2001.08.20 Бритов В.А. СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ И СРЕДСТВО ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
RU2348427C2 2009.03.10 Одоевская Ирина Михайловна (RU) АДЪЮВАНТНАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ИНЪЕКЦИОННЫХ ВАКЦИН ПРОТИВ ТКАНЕВЫХ ГЕЛЬМИНТОЗОВ
|
Вход
Регистрация
FAQ
Поиск
(до этого маска-очки-перчатки носил везде в общественных местах), но больше вроде не болел 