Паразитарная теория рака

К цитологии штамма Флекснер-Джоблинга
(Ст. научн. сотр. С.В.Павловская из отделения химиотерапии рака НИХФИ, Зав.- проф. М.М.Невядомский).

В 1906 г Флекснер и Джоблинг получили из спонтанной опухоли белой крысы штамм крысиного рака. Опухоль не была инкапсулирована, обладала инфильтративным ростом и образовывала метастазы. Гистологически сначала была признана смешенной клеточной саркомой.
С течением времени гистологическая картина как бы изменилась. В настоящее время большинством авторов опухоль считается карциномой.

В 1923 г в Германии Рода Эрдман опубликовал работу. Посвященную изучению биологических свойств карциномы и саркомы, а также эпителия и соединительной ткани. Воспитывая все эти четыре разнородные ткани в культурах in vitro, автор приходит к тому убеждению, что несмотря на полнейшее сходство роста карциномы и эпителия, с одной стороны, и соединительной ткани и саркомы - с другой, биологически они резко отличаются друг от друга.
Соединительная ткань при культивировании мало разжижает среду и сильно противостоит повышенной концентрации водородных ионов. С течением времени не дифференцируется на мускульную, хрящевую и костную ткань, но остается типическими фибробластами.
Эпителий растет мембранами и не может разрастаться без опорной ткани. Сильно разжижает среду.
Нормальные ткани, поставленные в условия, побуждающие их к безграничному росту, будучи перевитыми на животное, всегда вызывали образование гранулем. Перевивка же культур карциномы вызывала появление опухолей только при условии внесения вместе с раковыми клетками и клеток стромы. Прививка одними раковыми клетками давала отрицательный результат (карцинома штамма Флекснер-Джоблинга). Вещество, необходимое для роста опухоли, по мнению автора связано с плазмой крови и действует через клетки стромы.

Это положение впоследствии было опровергнуто Фишером.
Вырастив культуру карциномы эрлиховского штамма, автор путем прививки ее вызвал опухоли, причем оказалось, что строма совершенно исчезает после непродолжительного культивирования, и продолжают расти только одни карциноматозные . Этот автор считает, что злокачественность связана с эпителием.
Такую же картину наблюдал Ганс Лазар при культивировании in vitro опухоли штамма Флекснер-Джоблинга. Срезы многонедельных культур показывали, что вся строма отмирает и остаются только эпителиальные элементы. При перевивке на животное эти культуры также вызывали образование опухоли.
Возможность получения опухолей впрыскиванием бесклеточного фильтрата была блестяще доказана в 1910 г Пейтоном Роусом, Мерфи и Титлером. Попытки получить опухоль подобным же образом у млекопитающих начинаются с 1925 г.
Наиболее отчетливый результат был получен в 1926 г Рода Эртман. Автору удалось привить опухоль штамма Флекснер-Джоблинга бесклеточным фильтратом, предварительно обработав животное косметической тушью. Полученные опухоли гистологически не отличались от исходной опухоли. Рост их был относительно медленный. Без мобилизации ретикуло-эндотелиальной системы процент образования опухолей оказался крайне небольшим. Эти опыты были подтверждены Фишером на мышиных опухолях и Гаагеном на саркоме крыс.
Кроме того, в одной из работ Р.Эрдман описаны изменения, претерпиваемые кусочком опухоли штамма Флекснер-Джоблинга, трансплантированным под кожу крысы. По мнению автора некоторые части трансплантата переходят непосредственно в новую опухоль. Старая строма отмирает , строма же возникающей опухоли образуется в новом опухоленосителе.
Охарактеризовав этими немногими данными биологические особенности опухоли штамма Флекснер-Джоблинга, прейдем теперь к обзору работ по цитологии их.

Сюда относятся работы проф. Коха в Германии и проф. Невядомского в СССР.

Начиная с 1925 г проф. Кох выпускает серию работ, посвященных цитологии раковой опухоли человека, мышей и крыс.
В 1928 г выходит работа об инфекционности асцитной жидкости крыс, имеющих раковую опухоль брюшины штамма Флекснер-Джоблинга.
Описывая клетки ракового асцита , автор указывает на находящиеся там чуждые паразитические клетки. Среди них он различает следующие формы:
1. Нормальная форма, ядро которой окрашивается метилгрюнпиронином в голубой цвет; так называемые сине-белые клетки ( blauweisse Zellen). Форма и величина этих клеток сильно варьируют. Соотношения ядра и протоплазмы подвержены большим колебаниям. Ядро этих клеток по преимуществу расположено эксцентрично, ближе к краю клетки.
2. Амебовидные или саркодовые формы с неясными контурами, содержащие различное количество ядер разной формы.
3. Цисты или стадии множественного деления микроорганизма. Формы постоянной величины от 10 до 14 микрон или спорогония.
4. Шизогония.
5. Почкование и деление на 2 части у саркодовых и амебовидных форм.

Вышеназванные паразитические клетки наблюдались автором как экстра-, так и интрацелулярно в асцитной жидкости по преимуществу в макрофагах, очень редко в лейкоцитах.
Описывая клеточный состав мазков из опухолей, автор указывает на присутствие там эпителиальных клеток, составляющих главную массу опухоли. Эти клетки с большим ядром и несколькими большими ядрышками не всегда обладают протоплазмой ; встречается много голых ядер, рассматриваемых автором как подвергшихся дегенерации.
После перечисления находящихся там клеточных элементов крови автор останавливает свое внимание на чуждых паразитических клетках.

Цисты паразитических клеток трудно отличимы среди распада и лейкоцитов, но нормальные амебообразные и саркодовые формы отчетливо заметны и находятся в достаточном количестве.
Некоторые формы имеют строение сот, иные содержат в себе капельки жира. Отсутствие других включений указывает на неспособность их к фагоцитозу.
После этого автор дает описание гистологического строения опухоли штамма Флекснер-Джоблинга величиной с горошину. Основную массу опухоли составляют эпителиоидные клетки мазков, связанных друг с другом в общую правильную ткань. В нескольких пунктах встречаются дегенеративные зоны разной величины.
Наиболее богатой по содержанию чуждых клеток является пограничная зона между дегенерирующей и сохранившейся тканью, содержащей также большое количество сегментированных лейкоцитов. Лучше всего судить о присутствии чуждых паразитических клеток по интрацелулярным формам, находящихся внутри эпителиальных клеток.

В работе, вышедшей в 1933 г. автор подтверждает все ранее констатированные факты. Чуждые клетки в большом количестве содержатся, как раньше упоминалось, в раковом асците и геморрагическом содержимом цист размягченной части спонтанного мышиного рака. Эти Cellula cancrosa specifika никогда не образуют ткани; в каждой стадии развития они остаются изолированными организмами, клеточными индивидуумами. При описании нормальной формы автор указывает на существование в некоторых случаях ядрышка в ядре паразитической клетки, а так же на присутствие микронуклеуса около главного ядра на совершенно определенном расстоянии от него.
Протоплазма их не всегда гомогенна , иногда мелкозерниста или заметно сотового строения.
Встречающиеся маленькие голые ядра и ядроподобные образования автор считает истинными индивидуумами. Не только протоплазма , но и ядро чуждых клеток способно к амебовидному движению.
Что касается процесса размножения, то для автора еще является невыясненной способностью Cellula cancrosa specifika делиться кариокинетическим путем, но деление путем амитоза – простое деление на две части или отшнуровывание, а также шизогония, сегментирование и почкование наблюдались автором с большой отчетливостью.

Цикл развития паразитов автор наблюдал не только у крыс, но и в опухолях людей и мышей , и нашел у них большое сходство с размножением других клеточных паразитов. Асцитную жидкость раковой крысы автор рассматривает как чистую культуру паразитов.
При заражении крысы кусочками опухоли эпителиоидные клетки посаженного кусочка некротизируются или отмирают путем жирового перерождения. Жизнеспособными остаются лишь определенные стадии специфических паразитических клеток, которые, проникая в эпителиальные клетки животного организма, дают толчок к их сильному разрастанию, сопровождающемуся гипертрофией. Вскоре эпителиальные клетки погибают, причем паразиты остаются внеклеточными и свободными.

Гессе, сотрудник Коха, изучал свойства ракового асцита. Оказалось, что для получения опухолей достаточно впрыскнуть 0,5 – 1 куб.см асцитной жидкости в подкожную клетчатку, мышцы или брюшную полость крысы.
При фильтровании асцитной жидкости через свечу Беркефельда ее заразительность теряется; сходные результаты получаются при нагревании ее в течение 1 часа до 56 градусов, а так же при пребывании ее в термостате в течение 18 дней при 37 градусах. Воздействие низкой температуры (от + 2 до -1) в течение 2-3 –х недель не лишает ее инфицирующих свойств, но сильно увеличивает латентный период.

Проф. Невядомский в СССР описал в 1930 г предварительный цикл развития паразитов эрлиховского штамма.
В 1932 г вышла в свет работа о паразитах штамма Флекснер-Джоблинга.
В этой предварительной работе автор указывает на многообразие форм паразита, на сложные изменения хроматина ядра, на его своеобразное рассеивание и образование хромидий. Формы чуждого организма , находящиеся в опухоли, рассматриваются автором как клетки спорозоа. Величина их достигает 60 микрон и больше.

При метаморфозе клеточного ядра этих спорозоа вначале наступает накопление хроматина , который может выполнить всю клетку, образуя при этом большие сегменты. После своих изменений он распадается на отдельные хроматиновые глыбки и клеток варьирует. Нередко возле основного ядра появляется сеть хромидий, заполняющая постепенно всю клетку. Величина хромидий растет, они располагаются симметрично по периферии клетки в 2-3 концентрические ядра. Часто основное ядро сохраняется, и вся протоплазма оказывается насыщенной большими хроматиновыми зернами, но позднее основное ядро также распадается на глыбки хроматина.
Таким образом наступает стадия образования множественных ядер – стадия круглого шизонта в период возникновения ядер мерозоитов.
Дальнейшая эволюция приводит к типической меруляции. В отдельных хроматиновых глыбках начинается обособление черно-красного ядра и нежной голубоватой протоплазмы (окраска по Гимза) , а затем шизонт распадается на 16-32 и более мерозоитов с 1 или 2 кариосомами.

В опухолях это цикл представлен неясно,В них можно встретить отдельные хромидиальные клетки величиной до 30 микрон.

Автор так же упоминает о капсульных формах, мелких бесцветных образованиях, находящихся в ядрах и протоплазме любой стадии развития этих спорозоа. Описанный цикл позволяет предположительно относить этих спорозоа к порядку шизогрегарин.

Культивирование паразитов из опухолей ведет свое начало с 1929 г. Автором получены культуры как спонтанных, так и экспериментальных раков. Рост спорозоа выражался в трудно пересеваемом налете на поверхности агара; кроме того удалось получить рост в виде мути в конденсационной воде.
Было проведено 9 пересевов. Клетки основного посева сохранялись в течение года, но дальнейшие их пересевы не удавались.
Для поддержания нормального роста пересевы должны были производиться каждые 2-4 дня. Для пышного роста необходимо наличие эпителиальных элементов в подливаемой жидкости; для этого употребляется стерилизованный фильтрат 5 % эмульсии эпителиальных органов в растворе Локка или 5 % глюкоза. pH должен равняться 6,75.
Появление большого числа мелких форм и хромодиальных клеток, обнаруженных в культурах, говорит за рост спорозоа.

В культурах имеется большое разнообразие форм.
По большей части – это шизонты, ядра которых показывают различные стадии рассеивания хроматина. Их величина от 1-2-20 и до 40 микрон. Имеется ряд переходных форм от мелких до крупных;
Последние путем шизогонии дают начало мелким формам. Здесь же встречаются картины почкования. Почки вначале безъядерные , иногда снабжены длинными стержнями. Часто почки отделяются раньше, чем образуется в них ядро. Безъядерные формы представлены в большом количестве. Иногда в них можно рассмотреть хромидиальные зерна. Шизогония наблюдается в течение 5-7 дней с заметным нарастанием количества форм на 3-й день. Через 24-36 часов количество безъядерных форм начинает расти , затем в них появляется нежная хроматиновая сеть - возникает хромидиальная клетка. Автор подчеркивает преобладание шизогонии над процессами спорогонии. Необходимо отметить, что в культуре встречаются типические шизонты с вторичным ядром.

Иногда культура состоит из одних хромидиальных клеток. В культурах нет раковых клеток, так как, будучи туда помещены, они быстро отмирают.
Факт роста объясняется автором двумя возможностями:
это или переносчики возбудителя рака или сам возбудитель.
Последняя работа проф. Невядомского посвящена получению опухолей культурами паразитов штамма Флекснер-Джоблинга .
Автор сперва указывает на отличие раковых клеток от эпителиальных, заключающееся в отсутствии комплектности у раковых клеток и в наличии почкования, дающего начало новым клеткам. Затем подсчеты числа клеток в культурах доказывают рост , а следовательно и жизнь паразита.

Не менее убедительным фактом является наличие фигур кариокинеза, встречаемых в долго культивированных культурах (95 дней):
так же встречаются шизонты с двуконтурной оболочкой.
Раковые клетки, помещенные в эту среду, показали полный плазмолизм в 3-4 дня, то же происходит и с эпителиальными клетками до 2-х месяцев.
При дегенерации вышеупомянутых элементов никогда не наблюдалось образования специально дегенеративных клеток, а тем более – почкований.

Рост культуры, накопление форм лучше всего происходят при 21-22 градусах; температура 37-38 градусов приводит их к быстрому разрушению.
Вследствие своеобразной эволюции ядра шизонт превращается в типическую раковую клетку; таким образом у раковой клетки происходит циклическая смена форм, что противоречит ее эпителиальному происхождению.

Для доказательства специфичности этих культур поставлены опыты по получению ими опухолей. Автором получены через 27 дней после впрыскивания первой генерации 3 опухоли штамма Флекснер-Джоблинга, отличающиеся от основного штамма обилием соединительной ткани. Дальнейшая перевивка их не удалась. Получены так же 6 опухолей впрыскиванием культуры второй генерации. Эти опыты доказывают специфичность культур для рака данного вида.

Учитывая необходимость дальнейшей разработки цитологии штамма флекснер-Джоблинга, позволяющей подойти к этиологии этого заболевания, в нашей лаборатории были поставлены 3 серии опытов, включающие в себе как изучение гистологического изменения трансплантанта, введенного под кожу крысе, так и цитологического состава мазков развивающейся опухоли. Клетки чуждого организма , наблюдаемые во всех опухолях не только штамма Флекснер-Джоблинга, но и в других штаммах и спонтанных раках людей и животных, представлены большим разнообразием форм.
С наибольшей полнотой эти формы представлены в цистозной жидкости опухолей изучаемого нами штамма: так, в соку 48-дневной опухоли было констатировано до 40 различных образований, а в соку 53-дневной опухоли количество наблюдавшихся форм было такого же порядка.
Для описания их необходимо все количество форм разделить на 6 групп.

1.Группа шизонтов включает в себе 7 форм.
Эта группа представлена клетками по преимуществу круглой формы, величиной от 2 до 20 микрон, обладающих периферически расположенными ядрами разного строения и разных размеров. Некоторые ядра окружены ахроматиновым диском. Нередко встречаются клетки, содержащие секундарные ядра. Достигнув известного размера , подверженного небольшим колебаниям, они дают картины почкования. Здесь нужно упомянуть о формах, предшествующих образованию почкующихся форм. Если шизонт к моменту образования почек имел одно ядро, то оно дает рассеивание хроматина на определенном участке клетки, приобретшей с одной стороны несколько заостренную форму. Впоследствии почки появляются именно на этом месте. При наличии 2 ядер одно остается без изменений , а другое ведет себя вышеописанным образом. Почки представлены или круглыми образованиями гомогенной консистенции или же обладают ясно выраженным строением мелких шизонтов.

2. Под группой переходных форм надо понимать шизонтов размером от 5 до 12 микрон, обладающих «переходными ядрами» , из которых впоследствии по-видимому образуются ядра , сходные по строению с ядром раковых клеток. Протоплазма таких форм нежно пенистого строения, величина ядра варьирует. Хорошо представлены в препаратах, окрашенных по Феульгену.

3.Группа раковых клеток представлена клетками, обладающими большим пузырьковидным ядром, в петлях лининовой сети которого вкраплено различное количество ядрышек. Наиболее характерно содержание 2-3 ядрышек, но встречаются клетки с гораздо большим количеством их. В мазках из опухолей клетки эти не всегда имеют протоплазму и поэтому имеют вид голых ядер. Величина их разнообразна:
Наряду с крупными формами можно встретить клетки среднего размера и совсем маленькие формы. Довольно часто можно наблюдать синцитиальные массы большого размера, содержащие несколько ядер раковых клеток. Нередки картины сегментации ядра.

4.Эта группа образований может быть объединена под названием хромидиальных клеток ( терминология проф. Невядомского). Хромидиальные клетки получили свое название благодаря присутствию в их протоплазме нежной хроматиновой сети; кроме того они окружены двухконтурной оболочкой. Из них впоследствии образуются клетки , обладающие небольшими периферическими ядрами ( от 1 до 4).Величина этих клеток от 7 до 15 микрон.

5.Обращает на себя внимание наличие сидзигиеобразных и мицелиеобразных форм, отношение которых пока представляется неясным.
6.Кроме вышеописанных почкований формами размножения являются прямое деление клеток и кариокинез.

Применяемая методика окраски этих форм была следующая :
по Шаудин-гейденгайну, Шаудин-Гимза, Флеминг-Флемингу, Шаудин-Феульгену, а так же окраска на липоиды. Кроме того, просматривались нативные препараты в физиологическом растворе и суправитальные с окраской нейтральотом и по Коху (метилгрюн - пиронином).

После ознакомления с формами живого организма, встречающегося в опухолях, необходимо перейти к систематическому описанию этих форм в мазках и срезах, начиная с опухолей первых 20 дней и кончая опухолями большой давности.

Клеточный состав мазков односуточного трансплантата содержит в себе до 15 различных форм. Больше всего там шизонтов разной величины:
некоторые из них обладают многими ядрами, другие содержат переходные ядра. Там встречаются так же хромидиальные и синцитиеобразные клетки. Раковые клетки и клетки крови находятся в большом количестве. Между последними элементами много дегенеративных форм. Было обращено внимание на наличие раковых клеток с вполне сформированным ядром и массой вторичных ядер в протоплазме.
Цитологический состав двухсуточного трансплантата заметно беднее предыдущего; едва насчитываются 9 форм , большую часть которых составляют клетки первой группы .Здесь имеются шизонты с 6 переходными ядрами , почкование и небольшое число безъядерных клеток , а также мелкие голые ядра, получившие название «инициальных клеток» ( терминология проф. Невядомского).
Картина раковых клеток и клеток крови такая же , как и в однодневном трансплантате , но количество дегенеративных клеток большее, чем раньше.
Трех и четырех-суточные трансплантаты наряду с большей дегенерацией клеточных элементов дают количество форм, равное 8. Многие из встречающихся шизонтов имеют ахроматиновый диск. В некоторых клетках заметны инициальные клетки. Кроме шизонтов 1 группы имеются почкования и хромидиальные клетки.
Наименьшее количество всех ингредиентов оказалось в мазках из пятидневного трансплантата (около 5 форм). Раковые клетки, инициальные клетки и единичные небольшие шизонты составляют все его клеточные формы.

В шестидневном трансплантате имеются мелкие шизонты с 1 ядром, а так же с рассеянным хроматином. Раковые клетки разных размеров , мелкие по преимущетсву, без протоплазмы и почкования дают картину мазков этого дня (количество форм равно 8-ми).
Мазки из семидневного трансплантата снова бледны клеточными элементами.
Кроме раковых клеток, среди которых видны митозы, встречаются шизонты самого маленького размера. Ядра некоторых из них находятся в стадии кариокинеза.
8-й день развития трансплантата дает появление 13 форм: во-первых, это 7 форм первой группы. Во-вторых, раковые клетки, почкования и инициальные клетки.

В 9-дневном трансплантате , среди клеток дегенеративного характера заметны 7 форм. Это ---нормальные раковые клетки, 2 типа шизонтов, хромидиальные клетки с ядрами, мицелиеподобные формы и инициальные клетки.

На 10-й день пребывания трансплантата в организме крысы в мазках было замечено 4 формы: раковые клетки с протоплазмой и без нее, шизонты и безъядерные клетки.

На 11-дневном трансплантате были обнаружены митозы как в раковых клетках, так и в шизонтах. Кроме того там находятся мелкие и среднего размера шизонты, некоторые с вторичными ядрами, почкующиеся ядра и голые ядра раковых клеток различных размеров.

На 12-дневном трансплантате появляются 15 форм с преобладающим количеством шизонтов. Почкований нет. Раковые клетки сочны, количество инициальных клеток велико. Встречаются своеобразные клетки, содержащие до 18 ядер.

13 – и 14-дневные трансплантаты отличаются разнообразием форм раковых клеток и присутствием клеток с рассеянным хроматином.
В 14-дневном трансплантате отмечены так же хромидиальные клетки, переходящие в синцитий и инициальные клетки. Шизонты встречаются мелкие и среднего размера, некоторые с ахроматиновым диском, переходными ядрами и двуконтурной оболочкой. Шизонты находятся включенными в протоплазму некоторых раковых клеток, и наконец , шизонты среднего размера дают картину прямого деления.

15-дневный трансплантат можно охарактеризовать 8 формами.
Кроме раковых и безъядерных клеток имеются клетки с рассеянным хроматином , зернистые клетки и шизонты довольно крупного размера с несколькими ядрами, а также инициальные клетки.

16-й день. Здесь встречаются безъядерные и зернистые клетки. Шизонты или имеют вторичные ядра или ядра , находящиеся в различных стадиях эволюции (12 форм).

Раковые клетки 17-дневного трансплантата по большей части лишены протоплазмы, но встречаются ядра их, вкрапленные как бы в одну общую массу протоплазмы, так как границу отдельных клеток нельзя различить.
Среди клеточных ингредиентов можно насчитать 8 форм. Это – мелкие шизонты, безъядерные формы и инициальные клетки.

На 18-й день прекрасно видны раковые клетки с обособленной протоплазмой различного размера, но большинство клеток без протоплазмы.
Среди мелких и среднего размера шизонтов был обнаружен кариокинез их, а также формы с переходными ядрами.
После упомянутых элементов остается еще сказать о безъядерных клетках, почковании и инициальных клетках (11 форм).

19- дневная опухоль содержит 9 ингредиентов, 5 из них представляют собой шизонтов большой величины. В шизонтах и раковых клетках видны митозы. Инициальные клетки встречаются в довольно большом количестве.

На 20-й день отмечается уменьшение количества форм ( 5 форм). Кроме шизонтов обращают на себя внимание своеобразные выступы в ядрах некоторых раковых клеток, дающие впечатление начинающегося почкования ядра в них.
Попытаемся теперь описать формы, встречающиеся в опухолях на протяжении 111 дней по имеющемуся несколько несистематическому материалу.

Первая группа опухолей относится к концу третьего десятка дней и началу четвертого. Здесь мы встречаем наличие очень крупных шизонтов и инициальных клеток.

В опухоли № 32 имеется почкование шизонтов и мелкие формы их. Видны интрацелулярные формы, включенные в моноциты. А также хромидиальные клетки с ядрами.

Ко второй группе относятся опухоли пятого десятка. В этой группе (№ 41) отчетливо видны большие формы шизонтов, мицелиеподобные образования и почкования, а в опухоли № 45 превалируют, наоборот, шизонты мелкого и среднегоразмера. В № 47 дает формы мелкого размера наряду с большими. В мазках опухоли № 48 среди средних и мелких шизонтов обращает на себя внимание форма с симметрично расположенными внутри нее образованиями в количестве 40 штук, напоминающая обособление гамет.

Следующая группа охватывает №№ 50,53,54 и 58: в первой опухоли этой группы отмечаем шизонты средних размеров с переходными ядрами и ахроматиновым диском, инициальные клетки и клетки, содержащие большое количество ядер.
В ядрах некоторых раковых клетках заметны выступы (почки).

№ 53 дает большое разнообразие раковых клеток, особенно мелких и инициальных клеток.
В № 54 видны шизонты с картинами кариокинеза, шизонты с двухконтурной оболочкой и инициальные клетки.

В № 58 были обнаружены синцитиальные массы раковых клеток и крупные ядра их, а так же почкование шизонтов и ядер раковых клеток, хромидиальные клетки с ядрами и шизонты среднего и крупного размеров со многими переходными ядрами.

В 60-дневной опухоли содержится большое количество мелких форм шизонтов и инициальных клеток. В небольшом количестве встречаются шизонты среднего размера и почкования.

На 62–й день отмечены шизонты среднего размера , так же встречаются клетки с рассеянным хроматином , почкование ядер раковой клетки и шизонтов. Видны формы с переходными ядрами и кариокинез раковых клеток.

Восьмой десяток представлен опухолями №№ 73,74,75 и 79.
Встреченные там формы – это шизонты среднего и крупного размера; одни их них имеют ахроматиновый диск около ядра, другие содержат несколько ядер. Протоплазма некоторых форм нежного пенистого строения. Кроме того здесь встречаются клетки с рассеянным хроматином, безъядерные формы и почкование,в материнской клетке которого виден митоз.
В конце девятого десятка отмечаются шизонты средней величины , ветвистые формы , хромодиальные и инициальные клетки и почкование с кариокинезом.

96-дневная опухоль дает кроме почкования шизонтов картины рассеивания хроматина и шизонтов мелкого и среднего размера, а также своеобразную сегментацию хроматина ядра.
В опухоли № 102 встречаются шизонты очень мелкого размера, голые ядра раковых клеток различной величины; в некоторых видна сегментация хроматина. Кроме того здесь обнаружено много митозов.
В опухоли № 111 преобладающими элементами являются довольно крупные шизонты круглой и удлиненной формы. Видны хромидиальные клетки с ядрами и клетки с переходными ядрами, а также почкование.

Работы проф.Коха имеют большое значение, так как он вновь заострил внимание на существование в опухолях тех малых форм животного микроорганизма, которые были описаны до него Тома, Штейнгаузом и другими и подтверждены затем работами Невядомского и нами.

Проф.Кох несмотря на констатирование паразитов в опухолях все же держится клеточной теории происхождения злокачественных новообразований. Его паразит - только побудительная причина для разрастания эпителия, может быть неполноценного или находящегося в locus minoris residtentiae. Разрушив клетку хозяина, паразит делается свободным, размножается для того, чтобы снова заразить мелкими формами новую эпителиальную клетку.

Итак, очевидно только клетка, зараженная этим паразитом или отравленная его токсином, гипертрофируется и усиленно разрастается; таким образом получается впечатление, что почти в каждой эпителиальной клетке должен находиться паразитический организм, чего на самом деле нет.
Описанный цикл паразита, которому он дает заимствованное у Ганновера название Cellula cancrosa specifica, далеко не полно очерчен и не совпадает ни с одним из описанных в протистологии паразитов.
Относя предварительно этого паразита к амебо- или саркодеформам в первых работах, он в последней работе усматривает уже сходство этого паразита с плазмодием малярии.
Описанные им картины шизогонии мало типичны, а споргония - циста множественного деления - и вовсе своеобразна и мало похожа на формы спорогонии других паразитов.
Описание Кохом почкование резко отличается от почкований, описанных проф.Невядомским.

Все это вместе взятое не позволяет усмотреть какой-нибудь определенный цикл в его описании форм паразита, тем более что в одной из его работ имеется ряд совершенно произвольных толкований измененных соединительнотканных клеток (CbI.f.Bakt.,Bd. 118), которые он тоже считает за стадии своего паразита.

Работы Невядомского дают нам широкие перспективы.
Описав предварительный цикл развития паразита рака, автор культивирует затем его на питательных средах. В заключении он получает опухоли впрыскиванием первой и второй генерации культур этого протозоа.
Эти важные исследования оттеняют тот факт, что раковая опухоль берет свое начало из клеток этого протозоа, введенных в организм крысы. Появление опухоли того же штамма доказывает специфичность этих протозоа.
Неспособность полученных культурами опухолей к дальнейшим перевивкам говорит о необходимости усиления вирулентности этих организмов и о биологическом изменении паразитов, выросших в культурах.

Большую роль в жизни этих протозоа играют сложные изменения хроматина ядра так называемых шизонтов, совсем не наблюдавшиеся проф.Кохом. Хромидиальные и инициальные клетки, двуконтурная оболочка шизонтов и кариокинез их является также вполне обособленными формами проявления жизни этих организмов.

Гипотеза о постепенном превращении шизонтов в раковые клетки окончательно пока еще не подтверждена и нуждается в дальнейшей разработке экспериментальных данных, так как проф. Невядомский описал только одну стадию шизогонии - почкование шизонтов и образование из них мелких форм шизонтов, а процесс спорогонии им окончательно не прослежен, что заставило его в последней работе оставить открытым вопрос о принадлежности этого паразита к тому или иному класса у протозоа.

Необходимо подчеркнуть, что проф. Невядомскому впервые удалось получить культурами настоящие раковые опухоли того же штамма Флекснер-Джоблинга, от которого были получены культуры паразитов.
Несомненно важно, что опухоли развивались на месте прививки и давали метастазы и рецидивы после их вырезания.

В противовес проф.Коху проф. Невядомский считает,
что раковая клетка есть одна из стадий найденного им паразита; таким образом он солидаризуется с учениями Ганновера, Леберта, Одениуса и Адамкевича о Cellula cancrosa specifica.

Сопоставляя описанные нами картины цитологических ингредиентов штамма Флекснер-Джоблинга с формами , описанными проф.Кохом, мы с ясностью видим существенное расхождение с его описаниями, заставляющее нас рассматривать большое количество его форм не как клетки паразита, а частью как измененные клетки опухоли, частью же видеть в них дегенеративные паразитические формы , допускающие совсем иное толкование.

Что касается форм, описанных проф. Невядомским, то их наличие мы можем подтвердить точно так же, как и факты получения этих клеток в культурах, где своеобразное почкование, наличие кариокинетических фигур в шизонтах заставляют нас согласиться с мнением проф. Невядомского, что здесь мы имеем действительно клетки своеобразного паразита , тем более, что культуры двух первых генераций дали развитие типической опухоли Флекснер-Джоблинга.

Однако, со своей стороны мы считаем, что вопрос будет разрешен окончательно только после получения опухолей 3-й,4-й,5-й и т.д. генерации культур этого паразита.
Описав цитологические изменения, претерпеваемые опухолью во время ее разрастания, необходимо теперь описать ход развития трансплантата по гистологическим срезам.